Pravila za određivanje krvne grupe prema ABO sustavu

Postupak određivanja krvnih grupa prema ABO sustavusastoji se u otkrivanju antigena A i B u eritrocitima uporabom standardnih antitijela i korištenjem aglutinina u plazmi ili serumu analizirane krvi pomoću standardnih eritrocita. Tehnika je razvijena početkom 20. stoljeća i još uvijek se aktivno koristi u medicini. Određivanje antigena A i B provodi se zahvaljujući anti-A i anti-B tsoloklonima.

Osnovni pojmovi

Od davatelja se ne određuju samo antigeniu eritrocitima, ali i aglutinini u serumu (plazmi) koristeći standardne eritrocite. Venska krv koristi se kao biomaterijal. Prije studije potrebno je odreći se masne hrane dan prije analize i ne pušiti pola sata prije polaganja testa. Krvne grupe određuju se dva puta: prvo na odjelu za liječenje, gdje se materijal nabavlja, a zatim potvrđuje istraživanjem u laboratoriju.

Određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu jeglavni test koji se koristi u transfuziologiji. Neke životinje također imaju sličan sustav krvnih grupa, kao što su čimpanze, gorile i bonoboi.

Povijest otkrića

U znanosti postoji općeprihvaćeno mišljenje kojemetodu za određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu prvi je put otkrio Karl Landsteiner, austrijski znanstvenik, 1900. godine. Tada je u svom radu opisao tri vrste antigena. Za to je trideset godina kasnije dobio Nobelovu nagradu za medicinu i fiziologiju. Zbog činjenice da prije nije bilo uskih veza između znanstvenika, kasnije je utvrđeno da je češki serolog Jan Jansky, bez obzira na istraživanje K. Landsteiner, prvo opisao četiri ljudske krvne grupe, ali njegovo istraživanje nije bilo poznato širokoj publici. Trenutno je to klasifikacija koju je razvio Y. Yansky koja se koristi u Rusiji i republikama bivšeg SSSR-a. U Sjedinjenim Državama W.L.Moss napisao je slično djelo 1910. godine.

Metoda za određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu pomoću tsoloklona

Krvnu grupu treba odrediti u sobi sadobro osvjetljenje uz održavanje temperaturnog raspona od 15 do 25 Celzijevih stupnjeva, jer odstupanja od ove norme mogu utjecati na rezultate ispitivanja. Na pločici ili pločici ispisani su inicijali i prezime pacijenta. S lijeva na desno ili u krugu primjenjuju se standardne oznake skupina (O (I), A (II), B (III)). Ispod njih se stavljaju kap po kap odgovarajući serum s odvojenim pipetama za svaku vrstu. Tada im se dodaje krv pacijenta. Materijal za istraživanje uzima se iz ušne školjke ili prsta. To zahtijeva tehnika određivanja krvne grupe prema ABO sustavu.

Također je legalno koristiti crvene krvne stanice,u epruveti nakon stvaranja ugruška. Potrebno je da količina seruma bude deset puta veća od količine dodane krvi. Nakon toga, kapi se pomiješaju sa staklenim šipkama (posebno za svaku). U roku od pet minuta, lagano protresući ploču, promatrajte pojavu reakcije hemaglutinacije. Nalazi se u činjenici da se pojave male crvene kvržice, koje se zatim stapaju u veće. U to vrijeme serum gotovo u potpunosti gubi boju.

Kako bi se eliminirala lažna hemaglutinacijajednostavno lijepljenje crvenih krvnih zrnaca, trebate dodati jednu kap fiziološke otopine nakon tri minute i provjeriti ostaje li aglutinacija. Ako je tako, onda je istina. To je to, definicija krvnih grupa prema ABO sustavu sada je gotova.

Tumačenje rezultata

Kao rezultat, mogu se primijetiti četiri reakcije:

• ne javlja se aglutinacija ni s jednim serumom - prva skupina je O (I);
• reakcija se očitovala serumima I (ab) i III (a) - druga skupina A (II);
• aglutinacija se javlja kod seruma I (ab) i II (b) - treće skupine B (III);
• ako se reakcija dogodi s tri seruma,mora se provesti dodatni postupak s reagensima skupine AB (IV), koji su standardni; ako u takvom padu nema aglutinacije, možemo pretpostaviti da je to 4. krvna grupa AB (IV).

Brza metoda za Rh faktor

Metoda za određivanje krvnih grupa prema ABO sustavu uključuje istodobno otkrivanje Rh faktora (Rh).

Površina ploče je prethodno navlažena inapišite na njega "kontrolni serum" i "anti-rezus serum". Zatim se jedna ili dvije kapi potrebnih reagensa stave ispod natpisa i doda im se analizirani materijal. Da biste to učinili, također možete koristiti krv vrha prsta (u istoj količini kao i volumen seruma) ili crvene krvne stanice koje ostaju na dnu epruvete nakon pojave ugruška (polovica volumena seruma). Izbor materijala ne utječe na konačni rezultat. Zatim se krv i serum pomiješaju sa suhom staklenom šipkom, nakon čega se reakcija očekuje pet minuta. Kako bi se uklonila lažna očitanja, dodaje se izotonična otopina natrijevog klorida nakon tri do četiri minute (samo nekoliko kapi). Određivanje krvne grupe prema ABO i Rh sustavu provodi se vrlo često.

Ako se aglutinacija eritrocita u kapljici sajavlja se serum, to ukazuje na pozitivan rezus u krvi. Prema statistikama, Rh + se nalazi u 85% svjetske populacije. Njegova odsutnost omogućuje nam da govorimo o Rh-negativnoj pripadnosti. Ako se aglutinacija pojavi u kontrolnom serumu, tada je postala neupotrebljiva. Nažalost, algoritam za određivanje krvne grupe ABO ne funkcionira uvijek savršeno.

Koje se pogreške mogu napraviti ovom tehnikom?

Netočnosti u određivanju pripadnosti krvi određenoj skupini ovise o sljedećim razlozima:

• Tehnički.
• Biološka specifičnost krvi koja se proučava.
• Karakter defekta standardnih seruma i eritrocita.

Tehničke pogreške

Moguće pogreške u unakrsnom određivanju krvne grupe ABO sustava:

• Serum pogrešno postavljen na tanjur.
• Pogrešan kvantitativni omjer materijala.
• Korištenjem nedovoljno čistog posuđa ilipločice koje dolaze u kontakt s krvlju (svaki serum treba prikupiti zasebnom pipetom, koju treba oprati otopinom natrijevog klorida (u koncentraciji od 0,9%)).
• Pogrešan zapis analiziranog materijala.
• Nepoštivanje vremena potrebnog započetak aglutinacije, - ne biste trebali žuriti i uzimati u obzir reakciju prije isteka pet minuta, jer u krvi mogu biti slabi aglutinogeni. Prekomjerno izlaganje također se ne isplati, jer se kapi mogu isušiti s rubova i dovesti do lažnog zaključka. Važno je poštivati ​​pravila za određivanje krvne grupe prema ABO sustavu.
  
• Neispravno centrifugiranje također može dovesti do lažnih rezultata.
• Temperatura zraka veća od dopušteneutječe na odsutnost aglutinacije. Da biste izbjegli pogreške ove vrste, morate koristiti poseban serum dizajniran za rad u vrućim klimatskim uvjetima. Potrebno je odrediti krvne grupe na tanjuru ili ploči čija se vanjska površina spušta u hladnu vodu.

Biološke specifične pogreške

Pogreške povezane s biološkom specifičnošću analizirane krvi podijeljene su u dvije vrste.

• Ovisi o karakteristikama eritrocita.
• Pogreške zbog bioloških karakteristika seruma.

Razmotrimo svaku vrstu detaljnije.

Ovisno o karakteristikama eritrocita

• Kasna aglutinacija zbog "slabe"oblici eritrocita i antigena. Kako bi se izbjegle pogreške, potrebno je odrediti krvnu skupinu davatelja i primatelja pomoću standardnih eritrocita. Prepoznajte aglutinogen A₂ treba preispitati s drugim vrstama reagensa i ostalom staklenom posuđem, povećavajući vrijeme registracije reakcije.
• "Panagglutinacija" ("autoaglutinacija") - vještinakrv pokazuje istu nespecifičnu reakciju sa svim serumima, uključujući vaš vlastiti. Nakon pet minuta, ozbiljnost takve aglutinacije slabi, iako bi se trebala povećati. Slični slučajevi opažaju se u bolesnika s karcinomom, opeklina itd. Kao kontrolu potrebno je procijeniti manifestaciju aglutinacije analiziranih eritrocita u standardnom serumu četvrte skupine i fiziološkoj otopini. Kada se utvrdi "panagglutinacija" krvna grupa kao rezultat trostrukog pranja eritrocita. Ako ne daje željeni rezultat, vrijedno je ponovno uzeti uzorak krvi u epruvetu zagrijanu prije postupka i staviti uzorak u termokontejner kako bi se održala temperatura od 37 stupnjeva Celzijevih i više. Zatim je treba odnijeti u laboratorij gdje se održava gore navedena temperatura i koriste zagrijane fiziološke otopine, ploča i reagensi.

• Ponekad crvene krvne stanice u uzorku krviraspoređeni su poput "stupaca novčića" i mogu se zamijeniti s aglutinatima. Ako dodate dvije kapi izotonične otopine i lagano protresite tabletu, crvene krvne stanice su u ispravnom položaju.
• Nepotpuna ili mješovita aglutinacija koja se javlja u bolesnika s drugom, trećom i četvrtom skupinom kao rezultat transplantacije koštane srži ili u prva tri mjeseca nakon transfuzije krvi 0 (I).

Biološki serum

• Kao rezultat rutinskog testiranjaprethodnom senzibilizacijom otkrivaju se antitijela različite specifičnosti. Potrebno ga je odrediti i pokupiti eritrocite bez sadržaja antigena na koji je otkrivena imunizacija. Primatelj mora biti siguran da je pojedinačno odabrao kompatibilnu donatorsku krv.
• Nema antitijela A i B, što se opaža kod novorođenčadi i pacijenata koji pate od supresije humoralnog imuniteta.
• S formiranjem "stupaca novčića" nenormalnorezultat se mora potvrditi uzimanjem standardnih eritrocita prve skupine. Otopina natrijevog klorida i protresanje ploče pomažu u razlikovanju pravih aglutinata i hrpa novčića.
  

Pogreške povezane s upotrebom neispravnih standardnih eritrocita i seruma

Slabi serumi s prošlim rokom trajanja ili titrom manjim od 1:32 sposobni su generirati slabu i kasnu aglutinaciju. Upotreba takvih reagensa je neprihvatljiva.

Korištenje neupotrebljivih standardnih crvenih krvnih zrnacaili serumi pripremljeni u nesterilnim uvjetima i nedovoljno konzervirani, dovode do pojave "bakterijske" aglutinacije nespecifične prirode.

Postoje mnoge popularne pretpostavke okrvne grupe ABO sustava, koje su se pojavile neposredno nakon otkrivanja u različitim svjetskim kulturama. Tako je, na primjer, 30-ih godina prošlog stoljeća u Japanu i nekim drugim zemljama stekla popularnost teorija koja povezuje krvnu grupu s određenim tipom osobnosti. Slične su teorije popularne i danas.

Također postoji mišljenje da je osoba s skupinom A osjetljiva na ozbiljan mamurluk, O je povezan s dobrim zubima, a skupina A2 ima najviši nivo inteligencije. Ali takve tvrdnje nisu znanstveno dokazane.

Ispitivali smo određivanje krvnih grupa ABO sustavom pomoću standardnih seruma.